質(zhì)譜定量分析兩種方法及特殊定量細節

前文說(shuō)過(guò)了質(zhì)譜是怎么做到定量分析的，下面我們來(lái)看看具體的定量方法。常用的定量方法有兩種，外標法與內標法。

1. 外標法

用已知量的標準樣品A和未知量的待測樣品A分別進(jìn)行實(shí)驗；我們會(huì )得到以下三個(gè)信息：標準樣品的量（已知）；標準樣品的信號強度；待測樣品的信號強度。（假設樣品的響應=常數*濃度，從這三個(gè)信息即可算出待測樣品的量。）

為了更加精確地測定未知量的樣品，我們希望標準樣品的信號強度與待測樣品的信號強度盡量接近（以減少非線(xiàn)性響應的影響）。因此常用的外標法會(huì )測量一系列已知量的標準樣品，繪制一條工作曲線(xiàn)，再用擬合的方法確定未知樣的量。

2. 內標法

外標法主要有以下兩方面的局限：1標樣和待測樣是獨立進(jìn)行實(shí)驗的，實(shí)驗間的偶然誤差無(wú)法消除；2標樣和待測樣的基質(zhì)（即除待分析物外的其它成分）不同，基質(zhì)有可能會(huì )帶來(lái)不同的影響，也會(huì )產(chǎn)生誤差。

那么，如果我們把已知量的標準樣品B直接加入待測樣品A，就可以把標準樣品和未知樣品的測定在同一次實(shí)驗和同樣基質(zhì)中完成，也就消除了兩次實(shí)驗和基質(zhì)不同造成的誤差，這就是內標法。

（如果加入的標準樣品和待測樣品是同種物質(zhì)A，那么由于它們不可區分，只通過(guò)一次實(shí)驗是不能定量待測樣的，這時(shí)我們在加入標樣前后分別進(jìn)行兩次測量，即測量待測樣及待測樣+標樣的信號，即可計算出待測樣的量。）

質(zhì)譜相關(guān)的特殊定量細節

同位素稀釋

前面內標法的介紹中我們可以發(fā)現，理想的內標物既要和待測樣相同（具有相同的響應系數）又要不同（儀器可以區分二者的信號），這對矛盾的集合體就是同位素內標。

由于不同同位素的化合物具有近似相同的物理化學(xué)性質(zhì)，離子化時(shí)的響應通常也是相同的，而它們具有不同的質(zhì)荷比m/z，即可在質(zhì)譜中被區分出來(lái)。因此同位素標準品是理想的內標物。

另外，由于某些元素的天然同位素分布有一定的比例，當我們加入一定量的同位素內標時(shí)，可以把對信號絕對強度的測量轉化為對信號相對比例的測量，從而提高實(shí)驗的準確性。

選擇反應監測

在不太復雜的體系中，我們只要按照分子量就可以定性某種化合物了。但對于復雜混合物（如石油產(chǎn)品/生物樣品）而言，很多化合物具有相同或相近的質(zhì)量（同分異構體質(zhì)量*相同，有些化合物分子量非常接近，如CO和N2，要考慮儀器的質(zhì)量分辨率是否能區分二者），此時(shí)僅靠測量質(zhì)量就不能確定這個(gè)化合物是否就是我們關(guān)心的“the one”了。

在串聯(lián)質(zhì)譜 (Tandem MS) 儀器中，我們不僅可以把質(zhì)譜儀理解為一個(gè)稱(chēng)量離子的“天平”，它還具有了離子“鑷子”（選擇某個(gè)特定的離子把它分離出來(lái)）和“剪刀”（把某個(gè)/某些離子激活并打成碎片）的功能。

通過(guò)母離子和子離子的兩步選擇，我們可以在復雜體系中精確定位到我們關(guān)心的化合物，同時(shí)，兩次離子選擇還可減少復雜基質(zhì)的干擾，降低背景噪聲（獲得更低的檢出限）并提高方法的動(dòng)態(tài)范圍。因此選擇反應監測是目前色譜（氣相色譜/液相色譜）-質(zhì)譜聯(lián)用中常用的定量方法。